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          细胞培养——收到细胞的处理方式

          日期:2021-11-30 01:41
          浏览次数:115
          摘要:1. 收到细胞株包裹时, 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形, 若有请立即通知。细胞 株请尽速开始培养, 或立即冷冻保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。

                                                                             细胞培养——收到细胞的处理方式

                                                                                  圣宾仪器科技上海有限公司

                 细胞活化︰  
           1. 收到细胞株包裹时, 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形, 若有请立即通知。细胞  株请尽速开始培养, 或立即冷冻保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。   
          2.冷冻细胞解冻程序:  
          2.1. 依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比  例, 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之  血清种类, 若因实验需要, 必须有所不同时, 务必以缓慢比例渐次改变培养  基组成, 确定细胞适应后, 方进行所需之实验。 
          2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse  serum, 马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单指定之血清种  类培养之。 
          2.3. 将培养基置于37 °C 水槽中回温, 回温后喷以70 % 酒精并擦拭之, 移入无  菌操作台内。取出冷冻管, 立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 水面高度不可  接近或高过冷冻管之盖沿, 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全  部融化后, 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部, 移入无菌操作台内。 
          2.4. 依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask  中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基, 混  合均匀,放入37 °C,5 % CO2 培养箱培养。
          2.5. 对绝大多数细胞而言,1 % 以下之冷冻?;ぜ罝MSO,不会对细胞之贴附或活  化有不佳影响,不需立刻由解冻细胞中去除, 待di二天确定细胞生长或贴附良  好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞,需  立即去除DMSO 者, 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中,  离心300 xg (约1000 rpm),5 分钟,小心移去上清液,加入适量新鲜培养基,  将细胞均匀混合后, 转移至培养瓶中, 再放入37 °C, 5 % CO2 培养箱培养。 
          收到T25 flask 细胞时, 处理方式为︰  
          1. 于寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask 均加满培养基。请检查  flask 外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题, 不  要打开盖子,请立即通知细胞实验室。 
          2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C, 5 % CO2 培养箱中,使细胞回温至37 °C, 并  让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask  内之培养基,(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml 培养基于flask 内,依  一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。

                                                                                                                                                                             本篇转载至实验之家